線粒體異檸檬酸脫氫酶(ICDHm)樣本的前處理:
組織、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:
1、 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細胞,加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三,用冰浴勻漿器
或研缽勻漿。
2、 將勻漿 600g,4℃離心 5min。
3、 棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,11000g,4℃離心 10min。
4、 上清液即胞漿提取物,可用于測定從線粒體泄漏的 α-KGDH(此步可選做)。
5、 在步驟④的沉淀中加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率 20%或
200W,超聲 3 秒,間隔 10 秒,重復 30 次),用于線粒體 α-KGDH 活性測定。
測定步驟
1、 分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,調節波長至 340nm,蒸餾水調零。
2、 樣本測定
(1)在試劑五中加入 18mL 試劑四充分溶解,置于 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)
水浴 10min;現配現用;
(2)在試劑六中加入 1mL 蒸餾水,充分溶解待用;現配現用;
(3)在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 樣本、10μL 試劑六和 180μL 試劑五,混
勻,立即記錄 340nm 處 20s 時的吸光值 A1 和 2min20s 后的吸光值 A2,計算 ΔA=A2-A1。
內皮細胞分化鞘脂G蛋白偶聯受體1抗體
紅細胞分化相關因子1抗體
微管相關蛋白樣蛋白3抗體
內皮抑素/內皮他丁抗體
雌激素受體β抗體
雌激素受體α抗體
內質網Aβ相關結合蛋白抗體
Ephrin A2抗體
大腸埃希菌菌體蛋白抗體
雌激素硫酸轉移酶抗體
E Tag標簽抗體
登革熱病毒包膜糖蛋白E抗體
食道癌相關基因抗體
EB病毒核抗原抗體-3A抗體
膠質細胞谷氨酸運載蛋白1抗體
轉錄因子E2F-1抗體
內皮素轉化酶1抗體
細胞外基質蛋白1抗體
外胚層發育不良抗體
E2 tag標簽抗體
鐵螯合酶抗體
DH5α大腸桿菌菌體蛋白抗體
磷酸化絲裂原活化蛋白激酶1/2抗體
上皮細胞粘附分子抗體
酪氨酸蛋白激酶受體B2抗體
表皮生長因子抗體
表皮生長因子受體3抗體
酪氨酸蛋白激酶A4受體抗體
上皮鈣粘附分子抗體